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　　猪回肠炎又称增生性肠炎和增生性出血性肠炎，是猪的一种重要肠道疾病，主要表现为胞内劳森氏菌感染引起的回肠、盲肠和结肠粘膜的腺瘤样增生。该病易感染生长育肥猪和后备母猪，严重影响猪的饲料效率和生长速度以及养猪业的经济效益[1]。据Jensen统计，美国每头感染回肠炎的猪的经济损失至少为1.531美元[2]。

　　根据临床症状的不同，该病可分为急性型、慢性型和亚临床型。急性型多见于17周龄以上的小母猪和育肥猪，健康猪似乎更易患急性回肠炎[3]。常表现为出血性腹泻(图1)，甚至猝死。慢性和亚临床回肠炎没有典型的临床症状(图2、图3、图4)，2周至20周龄的猪容易感染[4]，无法根据临床症状进行诊断。

　　本实验采用劳森氏菌FIRSTtest TM诊断试剂盒对该猪场粪便样本中的胞内劳森氏菌进行检测，以了解肠炎的感染状况和时间点，为该病的精准策略药物预防或疫苗免疫提供实验依据。

　　1材料和方法

　　1.1样品收集

　　2011年12月，江苏省某规模化猪场随机采集特定周数新鲜软或水泥样粪便样品3克。样品主要来自4周龄、6周龄、8周龄、10周龄、12周龄、14周龄的后备母猪和经产母猪，每个阶段2-3个重复，取样后立即进行检测。

　　1.2检测试剂

　　在该试验中，使用德国Microcoat公司开发的Lawsonia FIRSTtest TM回肠炎现场诊断试剂盒(免疫磁珠法，美国礼来公司专利)。其原理与双抗体夹心ELISA相似。用包被在磁珠上的多克隆抗体捕获粪便中的胞内劳森氏菌，然后用多克隆抗体连接的过氧化物酶(POD)催化TMB显色，通过颜色变化定性检测胞内劳森氏菌的感染状态。通过比较颜色变化，半定量检测胞内劳森氏菌的感染状态。(图5)。

　　1.3检测方法

　　根据FIRSTtestTM试剂盒的说明，步骤如下。样本稀释沉淀：将1g粪便样本与5mL样本稀释缓冲液在样本收集管中混合，摇匀，置于试管架上5min；样品转移：分别用不同的移液管吸取0.5mL上清液于分析管(管内装有包被有劳森氏菌多克隆抗体的免疫磁珠)，设立阳性对照组(阳性对照组为0.5mL劳森氏菌菌液)，摇匀，然后将分析管置于试管架上孵育30min；磁珠的分离和清洗：将分析管转移到磁架上进行磁头分离，然后清洗两次；加入抗体-过氧化物酶结合物：在分析管中分别加入0.5mL抗体-过氧化物酶结合物，摇匀，然后将分析管放在试管架上孵育20分钟；磁珠的分离和洗涤：同步骤(3)；加入TMB显色：在分析管中分别加入0.5ml TMB底物显色液，设置阴性对照(阴性对照管含有包被劳森氏菌多克隆抗体的免疫磁珠)，摇匀，孵育7分钟；结果解读：将分析管放在磁铁架上，记录颜色变化。正片颜色是蓝色，负片液体是透明的。

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